透析即用半透膜(透析袋)将大分(fen)子蛋白质分(fen)离出(chu)来。
在生物大分子(zi)制(zhi)备过程(cheng)中除去(qu)盐(yan)、少量有机溶剂、生物小分子(zi)杂质(zhi)和浓(nong)缩样品,透析(xi)法最简便。
技(ji)术指标(biao):MWCO(截留分子量),单位:Diatoms 。
透析时,小于MWCO的(de)分子在透析(xi)膜二边溶液浓(nong)度差(cha)产生的(de)扩(kuo)散压作用(yong)下渗过透析(xi)膜,
其速(su)度(du)(du)与(yu)浓度(du)(du)梯度(du)(du)、膜面积(ji)及(ji)温度(du)(du)成正比。
欲快速透(tou)析(xi)可采用直(zhi)径较(jiao)小的透(tou)析(xi)袋以增加(jia)膜面积。
常用温度:4℃,升温、更换袋外透析液(ye)或用(yong)磁力搅拌器,均能提高(gao)透析速度。
使用(yong)须知:
① 某些化(hua)学物质会破(po)坏透析袋微孔且(qie)不可逆转(zhuan)。计有:
烃、卤化烃、醇、酮、酯、胺、丙酮、甲基(ji)乙基(ji)酮、二氧杂环(huan)乙烷(wan)、环(huan)已烷(wan)等。
酸(甲酸、乙(yi)酸、稀强酸如5%HCI),10%苯酚,30%双氧水。
甲醇、乙醇:浓度小于5%时,透(tou)析功能(neng)在,而MWCO变(bian)化。
② 蛋白质吸附量,小于(yu)1ug/克(ke),(以(yi)透(tou)析袋干重计(ji))。 正(zheng)常(chang)使(shi)用PH值5-9(可重复使用(yong))。极限
使(shi)用PH值(zhi)2-12(一次性使用)。
③ 前(qian)处理:煮沸(fei)5分(fen)钟后(hou)用(yong)蒸馏水60℃洗冲(chong)2分钟(zhong),置4℃蒸馏水中待(dai)用。
长期保存液:0。05%-0。1%叠氮钠,1mMEDTA或50%甘油,温(wen)度(4℃),使用前以蒸馏水洗(xi)净。
④ 即用型透析袋毋(wu)须前处理,使用前用蒸馏水洗净即可。
⑤ 透(tou)析(xi)袋装液时应留1/3-1/2空间,以防(fang)透(tou)析(xi)过程中(zhong),袋外(wai)的水(shui)和缓冲(chong)液过量进(jin)入袋内将袋涨破(含盐量高的蛋白质溶液透析过夜(ye)时,体积增加50%系正(zheng)常情况)。
⑥ 使用(yong)时须戴手套。
⑦ 透析效果(guo)检查(cha)用 1%氯(lv)化(hua)钡 检查(cha)硫酸铵、硫酸钠1%硝酸银 检查(cha)氯(lv)化(hua)钠、氯(lv)化(hua)钾。

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