透(tou)析即用半透(tou)膜(mo)(透(tou)析袋)将(jiang)大分子蛋白质分离出来。
在生物大分子(zi)制备过程中除(chu)去盐、少量有(you)机溶剂、生物小分子(zi)杂质和(he)浓缩样(yang)品,透析法(fa)最简便。
技术指标:MWCO(截留(liu)分(fen)子量),单(dan)位:Diatoms 。
透析时,小(xiao)于MWCO的分子在透析(xi)(xi)膜二(er)边溶液浓度差产生的扩散压作用下渗过透析(xi)(xi)膜,
其速度与浓度梯(ti)度、膜面积及温度成(cheng)正比(bi)。
欲(yu)快速透析可采用直径较小的透析袋(dai)以增加膜面(mian)积(ji)。
常用温度:4℃,升温、更换袋(dai)外透析液或用磁(ci)力搅拌器,均能(neng)提高透析速度。
使用须知(zhi):
① 某些化学(xue)物(wu)质会破(po)坏透析袋微孔(kong)且不可逆转。计(ji)有:
烃、卤化烃、醇、酮、酯、胺(an)、丙酮、甲基(ji)乙基(ji)酮、二氧杂环(huan)乙烷、环(huan)已烷等。
酸(suan)(甲酸(suan)、乙酸(suan)、稀强酸(suan)如5%HCI),10%苯酚,30%双(shuang)氧水。
甲醇、乙醇:浓度小于(yu)5%时(shi),透析功能(neng)在,而MWCO变化。
② 蛋(dan)白质吸附量,小(xiao)于1ug/克,(以透析(xi)袋干重计)。 正常使用(yong)PH值5-9(可(ke)重复使用)。极限(xian)
使用PH值2-12(一次性使(shi)用)。
③ 前(qian)处理:煮沸5分(fen)钟后(hou)用蒸馏水60℃洗(xi)冲2分钟,置(zhi)4℃蒸馏水中(zhong)待(dai)用。
长期(qi)保存液:0。05%-0。1%叠氮钠(na),1mMEDTA或50%甘油(you),温度(4℃),使用前(qian)以蒸馏水洗净。
④ 即用(yong)型透析袋毋须(xu)前处理,使用(yong)前用(yong)蒸馏水洗净即可。
⑤ 透析袋(dai)装(zhuang)液时应留1/3-1/2空(kong)间,以(yi)防透析过(guo)程中,袋(dai)外的水和缓冲液过(guo)量进入袋(dai)内(nei)将袋(dai)涨(zhang)破(po)
(含盐量高的蛋(dan)白质溶液(ye)透析过(guo)夜时,体(ti)积增加50%系正常(chang)情况)。
⑥ 使用时(shi)须戴手(shou)套。
⑦ 透析(xi)效果检查(cha)用 1%氯(lv)化钡 检查(cha)硫酸铵、硫酸钠1%硝(xiao)酸银 检查(cha)氯(lv)化钠、氯(lv)化钾。

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