透析即用半(ban)透膜(透析袋)将大分子蛋白质分离出(chu)来(lai)。
在(zai)生物大(da)分子制备过程(cheng)中(zhong)除去(qu)盐、少量有机溶剂、生物小分子杂质(zhi)和(he)浓缩(suo)样品,透(tou)析法(fa)最简便。
技(ji)术指标:MWCO(截(jie)留分子量(liang)),单(dan)位:Diatoms 。
透析时,小于(yu)MWCO的分子在(zai)透(tou)析膜(mo)二边溶液(ye)浓度差(cha)产生的扩散压作用下(xia)渗(shen)过透(tou)析膜(mo),
其速度(du)与浓度(du)梯度(du)、膜面积及温度(du)成(cheng)正比(bi)。
欲快速透(tou)析可采用直(zhi)径较(jiao)小的透(tou)析袋以增加膜面(mian)积(ji)。
常(chang)用(yong)温度:4℃,升温、更(geng)换袋外(wai)透析液或(huo)用磁力搅(jiao)拌器,均能提(ti)高透析速度。
使(shi)用须知:
① 某(mou)些化学物质会破坏透析袋(dai)微孔且不(bu)可逆转。计有:
烃、卤化烃、醇、酮(tong)、酯、胺、丙酮(tong)、甲(jia)基乙(yi)基酮(tong)、二氧杂环乙(yi)烷(wan)、环已烷(wan)等。
酸(suan)(甲酸(suan)、乙(yi)酸(suan)、稀强酸(suan)如5%HCI),10%苯酚,30%双氧水(shui)。
甲醇(chun)(chun)、乙醇(chun)(chun):浓(nong)度小(xiao)于(yu)5%时,透(tou)析(xi)功能在(zai),而MWCO变化。
② 蛋(dan)白质吸附(fu)量,小于1ug/克(ke),(以透析袋干重计)。 正常使(shi)用PH值5-9(可重(zhong)复使用)。极限
使用PH值2-12(一次性使用)。
③ 前处理:煮沸(fei)5分钟后用(yong)蒸馏水60℃洗(xi)冲(chong)2分钟,置(zhi)4℃蒸(zheng)馏(liu)水中待用(yong)。
长期保(bao)存(cun)液:0。05%-0。1%叠氮钠,1mMEDTA或50%甘油,温度(4℃),使用前以蒸(zheng)馏(liu)水洗净。
④ 即(ji)用型透析袋毋(wu)须前处理(li),使用前用蒸(zheng)馏水(shui)洗净即(ji)可(ke)。
⑤ 透(tou)析袋(dai)(dai)装液时应(ying)留1/3-1/2空间,以防透(tou)析过(guo)程(cheng)中,袋(dai)(dai)外的水(shui)和缓(huan)冲液过(guo)量进入(ru)袋(dai)(dai)内将袋(dai)(dai)涨破(po)
(含盐量高的蛋白质溶(rong)液透(tou)析过夜(ye)时,体积增加50%系(xi)正常情(qing)况)。
⑥ 使用时须(xu)戴手套(tao)。
⑦ 透析效(xiao)果检查(cha)用 1%氯化(hua)钡(bei) 检查(cha)硫(liu)酸(suan)铵、硫(liu)酸(suan)钠1%硝酸(suan)银 检查(cha)氯化(hua)钠、氯化(hua)钾
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