透(tou)析即用半透(tou)膜(透(tou)析袋)将大分(fen)子蛋白质分(fen)离出来(lai)。
在生物(wu)大分子(zi)制备过程中除去盐、少量有机溶剂(ji)、生物(wu)小分子(zi)杂质和浓缩(suo)样品,透析(xi)法(fa)最简便。
技术指标:MWCO(截留分子(zi)量),单(dan)位:Diatoms 。
透析时,小(xiao)于(yu)MWCO的分子在透(tou)析(xi)(xi)膜二边溶(rong)液(ye)浓度差(cha)产生(sheng)的扩散压作用(yong)下渗过透(tou)析(xi)(xi)膜,
其速度与浓度梯(ti)度、膜面积及温度成正比。
欲快速透析(xi)(xi)可采用直(zhi)径较小的透析(xi)(xi)袋以增加膜面积(ji)。
常用(yong)温度:4℃,升温、更换袋外透(tou)析液或用磁(ci)力搅拌器,均能提高透(tou)析速度。
使用须(xu)知(zhi):
① 某些化(hua)学物质会破坏透析袋微孔且(qie)不可逆转。计有:
烃、卤化烃、醇、酮、酯、胺、丙(bing)酮、甲基(ji)乙基(ji)酮、二氧杂环乙烷(wan)、环已烷(wan)等(deng)。
酸(甲(jia)酸、乙酸、稀强酸如5%HCI),10%苯酚,30%双氧水。
甲醇、乙醇:浓(nong)度小于(yu)5%时(shi),透析功(gong)能在,而MWCO变化。
② 蛋白(bai)质吸(xi)附(fu)量,小于1ug/克,(以透析(xi)袋干(gan)重计(ji))。 正常使用PH值5-9(可重复(fu)使用)。极限
使用PH值2-12(一次性使(shi)用(yong))。
③ 前处理(li):煮沸5分钟(zhong)后用蒸馏水(shui)60℃洗冲2分钟,置4℃蒸馏水中(zhong)待用。
长期(qi)保存液:0。05%-0。1%叠氮(dan)钠(na),1mMEDTA或50%甘油(you),温度(4℃),使用前以蒸馏水洗净。
④ 即(ji)(ji)用型透析袋(dai)毋须前处(chu)理,使用前用蒸馏水洗净即(ji)(ji)可。
⑤ 透(tou)析袋(dai)(dai)装液时应留(liu)1/3-1/2空间,以(yi)防透(tou)析过(guo)(guo)程中,袋(dai)(dai)外的水和缓冲液过(guo)(guo)量进入袋(dai)(dai)内将(jiang)袋(dai)(dai)涨(zhang)破
(含盐量高的蛋(dan)白(bai)质溶(rong)液(ye)透析过夜时,体积增加50%系正常情况)。
⑥ 使用时须(xu)戴手套。
⑦ 透(tou)析效果检查用 1%氯(lv)化(hua)钡 检查硫酸(suan)铵、硫酸(suan)钠(na)1%硝酸(suan)银 检查氯(lv)化(hua)钠(na)、氯(lv)化(hua)钾
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