透析即用半透膜(透析袋)将(jiang)大(da)分(fen)子蛋(dan)白质分(fen)离出来(lai)。
在生(sheng)物(wu)(wu)大分(fen)子制备(bei)过程中除去盐、少量有机(ji)溶剂、生(sheng)物(wu)(wu)小分(fen)子杂质和浓缩(suo)样品,透析(xi)法最(zui)简便。
技(ji)术指(zhi)标:MWCO(截留分子量),单(dan)位:Diatoms 。
透析时,小于MWCO的(de)分子在透(tou)析膜二边溶液浓度差产生的(de)扩散(san)压作用下渗(shen)过透(tou)析膜,
其速度(du)(du)(du)与浓度(du)(du)(du)梯度(du)(du)(du)、膜面积及温度(du)(du)(du)成正比。
欲快速透析(xi)可(ke)采用直径较小的透析(xi)袋以增加(jia)膜面(mian)积。
常(chang)用温度:4℃,升温(wen)、更(geng)换袋外透析液或用磁力搅拌器(qi),均能(neng)提高透析速度。
使(shi)用须知:
① 某(mou)些化学物(wu)质会破坏(huai)透析(xi)袋微孔且不可逆转。计有(you):
烃(ting)、卤化烃(ting)、醇、酮(tong)、酯、胺、丙(bing)酮(tong)、甲基(ji)乙(yi)基(ji)酮(tong)、二氧杂(za)环(huan)乙(yi)烷、环(huan)已烷等。
酸(suan)(甲酸(suan)、乙酸(suan)、稀(xi)强酸(suan)如5%HCI),10%苯酚,30%双氧水(shui)。
甲醇(chun)、乙醇(chun):浓度(du)小(xiao)于(yu)5%时,透析(xi)功能在,而MWCO变化(hua)。
② 蛋白(bai)质吸(xi)附量,小于1ug/克,(以透析袋干重计)。 正(zheng)常使(shi)用PH值5-9(可重(zhong)复(fu)使用)。极(ji)限
使用PH值2-12(一次性使用)。
③ 前处理:煮沸5分(fen)钟(zhong)后(hou)用蒸馏水60℃洗冲2分钟,置(zhi)4℃蒸馏水中待(dai)用。
长(zhang)期保存(cun)液(ye):0。05%-0。1%叠氮钠,1mMEDTA或50%甘油,温(wen)度(4℃),使用(yong)前以蒸(zheng)馏(liu)水洗净。
④ 即用型透(tou)析(xi)袋(dai)毋须(xu)前处理,使用前用蒸馏水洗净(jing)即可。
⑤ 透析袋(dai)(dai)装液时应留1/3-1/2空间,以防透析过程(cheng)中,袋(dai)(dai)外的水和缓(huan)冲液过量进入袋(dai)(dai)内将袋(dai)(dai)涨破(po)
(含盐量高(gao)的蛋白质溶液(ye)透析(xi)过夜时,体(ti)积增加(jia)50%系正常情况)。
⑥ 使用时须戴手套。
⑦ 透析效果检查用 1%氯化(hua)钡 检查硫酸(suan)铵、硫酸(suan)钠(na)1%硝酸(suan)银 检查氯化(hua)钠(na)、氯化(hua)钾
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