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产品信(xin)息：

名(ming)称：4’,6-Diamidino-2-phenylindole dihydrochloride (DAPI)
说明：DNA链荧光染色。
别名(ming)：2-(4-Amidinophenyl)-6-indolecarbamidine/dihydrochloride
分子式：C16H15N5 · 2HCl       

分子量：350.25
CAS：28718-90-3
外(wai)观(guan)：黄色(se)结晶性(xing)粉末
特(te)性：纯度：≥90% (HPLC和 TLC)
溶解(jie)性：溶于水，最大参考浓度20mg/ml，加热有(you)助于溶解(jie)。
R：36/37/38        S：26-36

用于(yu)细胞核染(ran)色时，推荐的DAPI工作(zuo)浓度为0.5-10μg/ml。

储存(cun)条件： −20℃避光保(bao)存(cun)            

DAPI简要(yao)说明

收到后储藏：*室温  *避光

分子量:• 350.3 (dihydrochloride)    • 457.5 (dilactate)

吸收峰/散(san)射峰是(shi)461nm/358nm。连接至(zhi)DNA

DAPI是一(yi)种(zhong)常(chang)用的(de)多色核荧光(guang)染料它的(de)蓝(lan)色荧光(guang)颜色光(guang)鲜显著区别于其他(ta)结(jie)构荧光(guang)探针所发出的(de)绿、黄(huang)、红等荧光(guang)。

使用(yong)(yong)(yong)时(shi)应遵照我们的备忘录(lu)，DAPI染(ran)色(se)(se)(se)剂专用(yong)(yong)(yong)于胞(bao)(bao)核染(ran)色(se)(se)(se)，几(ji)乎没有细(xi)胞(bao)(bao)质标(biao)记(ji)(ji)点。任意一形态的DAPI在这说明内介绍的都有很好的效果。DAPI, dilactate可(ke)能水溶性更好。复(fu)染(ran)技(ji)术说明与宽范围细(xi)胞(bao)(bao)学标(biao)记(ji)(ji)技(ji)术相同(tong)———直接或间接抗体结(jie)合探测方(fang)法，mRNA原位杂交或用(yong)(yong)(yong)细(xi)胞(bao)(bao)结(jie)构(gou)特异性荧光染(ran)料染(ran)色(se)(se)(se)。DAPI还可(ke)用(yong)(yong)(yong)于在多(duo)色(se)(se)(se)流式细(xi)胞(bao)(bao)试(shi)验中(zhong)分析荧光标(biao)记(ji)(ji)细(xi)胞(bao)(bao)。以(yi)下说明可(ke)用(yong)(yong)(yong)于指导(dao)组(zu)织(zhi)染(ran)色(se)(se)(se)或非(fei)固定的细(xi)胞(bao)(bao)或组(zu)织(zhi)染(ran)色(se)(se)(se)。

绪(xu)论

蓝色荧(ying)光的(de)DAPI核酸染(ran)料优先染(ran)双链DNA，它与小沟(gou)槽内(nei)的(de)AT碱(jian)基对结合。1. DAPI连(lian)接到(dao)双链DNA产(chan)生一个20折叠(die)的(de)荧(ying)光增强这是(shi)由于水分子在DAPI以及小沟(gou)槽的(de)移(yi)位造成的(de)。2.DAPI 也可以用(yong)于连(lian)接RNA，只是(shi)连(lian)接的(de)方式不(bu)同———一种(zhong)观点是(shi)可能是(shi)AU碱(jian)基对选择性(xing)嵌入(ru)。3. DAPI/RNA 复(fu)合体(ti)可以出(chu)现更长(zhang)波长(zhang)的(de)最大荧(ying)光激发(fa)比DAPI/dsDNA复(fu)合体(ti)并且量(liang)子产(chan)率仅为(wei)它的(de)20﹪。

材(cai)料(liao)储存与操作:

DAPI dihydrochloride (MW = 350.3) 与(yu)DAPI dilactate(MW = 457.5)均为(wei)10mg包装的。FluoroPure™（荧(ying)光纯(chun)(chun)）级别的DAPI dihydrochloride 纯(chun)(chun)度 ≥98%也(ye)为(wei)10mg包装的。收到后(hou)将管(guan)形瓶存(cun)(cun)放于室温并避(bi)光保存(cun)(cun)。固体至少可(ke)稳定保存(cun)(cun)一年(nian)。

将5 mg/mL DAPI(14.3 mM 的(de)dihydrochloride 或10.9 mM 的(de) dilactate)溶(rong)解(jie)到(dao)(dao)一个管形瓶（10 mg）有2 mL 的(de)去离子水(shui) (dH2O) 或是(shi)二甲基酰胺 (DMF)。水(shui)溶(rong)性差的(de)DAPI dihydrochloride溶(rong)到(dao)(dao)水(shui)中可能需(xu)要(yao)更长的(de)时(shi)间，声裂法有时(shi)是(shi)必要(yao)的(de)。

要点:

没有一种DAPI衍生(sheng)物(wu)是极易溶于磷酸盐缓冲生(sheng)理盐水(PBS)的。需长期保(bao)存(cun)时原(yuan)液可(ke)(ke)分装并保(bao)存(cun)在(zai)(zai)≤–20°C。短(duan)期保(bao)存(cun)时可(ke)(ke)以(yi)在(zai)(zai)2–6°C避光保(bao)存(cun)。操作(zuo)适当DAPI溶液至少可(ke)(ke)稳定保(bao)存(cun)六个(ge)月。

注意:

DAPI是已知(zhi)的(de)一种诱变剂，操作要小心(xin)。颜(yan)料必须(xu)安(an)全可控的(de)处(chu)理(li)。DAPI可在(zai)水溶液(ye)中被活性(xing)炭滤过。吸附颜(yan)料的(de)炭必须(xu)经安(an)全可行的(de)方(fang)法处(chu)理(li)。

荧光(guang)光(guang)谱性(xing)质:

DAPI 结合到 dsDNA上吸收(shou)峰(feng)(feng) 是(shi)358 nm, 散射峰(feng)(feng)是(shi) 461 nm。DAPI能够(gou)被氙或水银灯或UV激(ji)光激(ji)发。利用UV激(ji)发源(yuan)DAPI可被用于流式细胞(bao)计量术。

荧光显(xian)微术(shu)中复染法粘附细胞的(de)说明

样(yang)品制备:

用固定法处理你的(de)标本，DAPI染(ran)色通(tong)常(chang)在其(qi)他染(ran)色的(de)最后进行。注意：标本的(de)固定和透化并非(fei)DAPI复染(ran)的(de)必要(yao)步骤。

复(fu)染(ran)法(fa)说明:

1.1 将标本简单的放入(ru)磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)中保持平衡。

1.2 在PBS中(zhong)将(jiang)DAPI原液稀释到 300 nM，将(jiang)大约(yue)300 μL 这种稀释的 DAPI染液加到盖玻片上制(zhi)备，确保(bao)细(xi)胞被完(wan)全(quan)覆盖。

1.3 培养1–5 minutes.

1.4 将标本在PBS液中冲(chong)洗几次，滤干盖玻片上(shang)过多的缓冲(chong)液。我(wo)们(men)推荐使用固(gu)装的含有抗(kang)退色试剂的介(jie)质，如我(wo)们(men)独家提供(gong)的SlowFade ® Antifade Kit (S2828), SlowFade Light Antifade Kit(S7461) or ProLong ® Antifade Kit (P7481).

1.5 用荧(ying)光(guang)显微镜及(ji)合适的滤镜观察标(biao)本(ben)

流式细(xi)胞计量术(shu)中悬浮细(xi)胞复染(ran)的(de)说(shuo)明

样品(pin)制备(bei)：

用固定法(fa)处理(li)你的标(biao)本或采(cai)取以下方法(fa)：

2.1 收集2 × 105 到(dao) 1 × 106 cells的细胞悬液一份。

2.2 通(tong)过离心(xin)及去除上(shang)悬(xuan)浮物来获得细胞团块。

2.3 将在残留液的团块重新悬浮，并在室温中加入1 mL 的 PBS。

2.4 将(jiang)重新悬浮(fu)细胞整体(ti)转移(yi)到4 mL –20°C的(de)无(wu)(wu)水(shui)乙(yi)醇中。转移(yi)时通过移(yi)液缓慢的(de)将(jiang)悬浮(fu)液在旋转峰速(su)时移(yi)入乙(yi)醇中。留细胞在–20°C的(de)无(wu)(wu)水(shui)乙(yi)醇中放置 5–15 minutes。

2.5 通过离心及去除上悬浮物来获(huo)得细(xi)胞团块

2.6 轻(qing)弹(dan)试管(guan)使团块松动(dong)在室温下加(jia)入5 mL的(de)PBS让细(xi)胞再水合15 minutes

复染(ran)法(fa)说明：

3.1 将DAPI原液稀释到3 μM在染色缓冲液中(100 mM Tris, pH 7.4, 150 mM NaCl, 1 mM CaCl2, 0.5 mM MgCl2, 0.1% Nonidet ® P-40).每(mei)个(ge)细(xi)胞(bao)标本需要1 mL

3.2 离心悬浮细胞(from step 2.6)弃(qi)上清，轻弹松动团块并加1 mL DAPI在(zai)缓冲液(ye)中(zhong)的稀释液(ye)。

3.3 室温下培养15 minutes。

3.4 在染(ran)料存在的(de)情(qing)况下用流式细(xi)胞仪分析。如(ru)果细(xi)胞在荧光显(xian)微镜下可见，离心标本(ben)弃上(shang)清并且(qie)在新鲜(xian)缓冲液(ye)中再悬(xuan)浮(fu)。点一滴悬(xuan)液(ye)在载(zai)玻片(pian)上(shang)，盖盖玻片(pian)观察。

染(ran)色(se)体荧(ying)光素原位(wei)杂交复染(ran)法的(de)说明(ming)

样品准备：

根据标准步骤5，6准备标本。

在复(fu)染(ran)(ran)之前用去离子水(shui)快(kuai)速冲洗备好的(de)样本以去除残留在玻片上的(de)buffer盐，这最后的(de)冲洗有助于减(jian)少玻片上的(de)非(fei)特异背(bei)景染(ran)(ran)色。

将标(biao)本在空气中晾(liang)干。

复染说明(ming)：

4.1 用PBS将DAPI原液(ye)稀释(shi)到(dao)30nM，将300μL这种染(ran)(ran)色(se)液(ye)直接移取到(dao)标本上(shang)(shang)，用一个塑料(liao)的盖(gai)玻片使染(ran)(ran)液(ye)在玻片上(shang)(shang)分布均匀。

4.2 将(jiang)标本在暗房中室温培养30分钟。

4.3 小(xiao)心的(de)移去盖玻片，用PBS 或dH2O快(kuai)速冲(chong)洗标本，以除去未结合的(de)染(ran)液。

4.4 用吸水纸在组织周围轻(qing)轻(qing)印拭去(qu)玻片(pian)上(shang)多余的(de)液体(ti)。

4.5 将(jiang)一(yi)个玻璃盖(gai)玻片盖(gai)到(dao)载玻片上，用(yong)蜡或者指甲油封闭，也可以(yi)将(jiang)标本按照(zhao)厂(chang)商的说明用(yong)抗脱色试剂包埋。

4.6 用荧光显(xian)微镜在适当的滤光器下观察标本。