产品分类
产品中心
产品信息(xi)：
中文(wen)名称：蛋白酶K
英文(wen)名称：Proteinase K
蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)酶(mei)(mei)k是(shi)一种枯草(cao)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)酶(mei)(mei)类的(de)(de)(de)(de)高活(huo)性(xing)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)酶(mei)(mei)，用于(yu)生物(wu)样品(pin)中蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)质的(de)(de)(de)(de)一般降解。从(cong)林伯(bo)氏白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)色念球菌（tritirachium album limber）中纯化得到。据资(zi)料显示：该酶(mei)(mei)有(you)两个(ge)ca2+结合位点(dian)，它们离(li)酶(mei)(mei)的(de)(de)(de)(de)活(huo)性(xing)中心有(you)一定距离(li)，与催(cui)化机理并(bing)无直接关系。然(ran)而，如果从(cong)该酶(mei)(mei)中除去(qu)ca2+，由于(yu)出(chu)现(xian)远程(cheng)(cheng)的(de)(de)(de)(de)结构(gou)变化，催(cui)化活(huo)性(xing)将丧失80%左右，但(dan)其剩余(yu)活(huo)性(xing)通常(chang)已足以(yi)降解在(zai)一般情况(kuang)下污(wu)染酸制品(pin)的(de)(de)(de)(de)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)质。所以(yi)，蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)酶(mei)(mei)k消(xiao)化过(guo)程(cheng)(cheng)中通常(chang)加入(ru)edta（以(yi)抑制依赖于(yu)mg2+的(de)(de)(de)(de)核酸酶(mei)(mei)的(de)(de)(de)(de)作(zuo)用）。但(dan)是(shi)，如果要(yao)消(xiao)化对蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)酶(mei)(mei)k具有(you)较强耐性(xing)的(de)(de)(de)(de)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)，如角蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)一类，则可(ke)能需要(yao)使用含(han)有(you)1mmol/l ca2+而不含(han)edta的(de)(de)(de)(de)缓冲液。在(zai)消(xiao)化完(wan)毕后、纯化核酸前要(yao)加入(ru)EGTA（ph8.0）至终浓度为2mmol/l,以(yi)鳌(ao)合ca2+。蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)酶(mei)K，是(shi)一种切割活性较(jiao)广(guang)的(de)丝(si)氨(an)酸(suan)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)酶(mei)。它(ta)切割脂族氨(an)基酸(suan)和(he)(he)芳香族氨(an)基酸(suan)的(de)羧基端肽(tai)键。此酶(mei)经纯(chun)化去除(chu)(chu)了RNA酶(mei)和(he)(he)DNA酶(mei)活性。由于(yu)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)酶(mei)K在(zai)(zai)尿素和(he)(he)SDS中稳定(ding)，还具有(you)降解(jie)天(tian)然蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)质(zhi)的(de)能力，因而它(ta)应用很广(guang)泛，包括制备脉冲电泳(yong)的(de)染色体DNA，蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)质(zhi)印迹以及去除(chu)(chu)DNA和(he)(he)RNA制备中的(de)核酸(suan)酶(mei)。蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)酶(mei)K的(de)一般工作浓度是(shi)50—100μg/ml。在(zai)(zai)较(jiao)广(guang)的(de)pH范围(wei)内（pH 4-12.5）均有(you)活性。
推(tui)荐反应缓(huan)冲液(ye)：50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2 ;。
蛋(dan)白(bai)酶(mei)(mei)(mei)K配制(zhi)标准(zhun)：20mg/ml蛋(dan)白(bai)酶(mei)(mei)(mei)K配制(zhi)标准(zhun)（proteinase K）：将200mg的蛋(dan)白(bai)酶(mei)(mei)(mei)K加入(ru)到(dao)9.5ml水中，轻(qing)轻(qing)摇动，直至蛋(dan)白(bai)酶(mei)(mei)(mei)K完全溶解(jie)。不要涡(wo)旋混合。加水定(ding)容到(dao)10ml，然后(hou)分(fen)装成小份贮存于-20℃。
蛋白(bai)酶(mei)k的作用
值得注意的(de)是，蛋(dan)白酶K在原位杂交(jiao)(jiao)技(ji)术中通常(chang)用于杂交(jiao)(jiao)前(qian)的(de)处理(li),它(ta)具有消(xiao)(xiao)化包围靶(ba)DNA蛋(dan)白质的(de)作用,以增加(jia)探针与靶(ba)核酸结合的(de)机会(hui),提高杂交(jiao)(jiao)信号.但蛋(dan)白酶K的(de)浓度过高、消(xiao)(xiao)化时间过长或孵育温度过高时,都会(hui)对(dui)细胞的(de)结构有一定的(de)破坏(huai),导(dao)致组织切片的(de)脱落,细胞核的(de)消(xiao)(xiao)失,从而影响杂交(jiao)(jiao)结果.EDTA缓冲液可以替代蛋(dan)白酶K的(de)作用,解(jie)决上述出现的(de)问(wen)题,并能达到(dao)理(li)想的(de)染色效果.
蛋白酶(mei)k的保存(cun)：保存(cun)在－20℃冰箱里，避(bi)免反复(fu)冻(dong)融，有效保证12月。
孵(fu)育(yu)温(wen)度为(wei)(wei)(wei)55至65℃，理想(xiang)孵(fu)育(yu)温(wen)度为(wei)(wei)(wei)58℃，孵(fu)育(yu)时(shi)(shi)(shi)间为(wei)(wei)(wei)15分钟至48小时(shi)(shi)(shi)；理想(xiang)孵(fu)育(yu)时(shi)(shi)(shi)间为(wei)(wei)(wei)2小时(shi)(shi)(shi)。
From……………………Tritirachium album
Appearance……………purified lyophilized form
Activity………………….≥30 units/mg dry weight
Specific activity………..≥40 units/mg protein
说(shuo)明：One unit is defined as the amount of enzyme that will liberate 1.0 μmol tyrosine from casein per min at37°C, pH 7.5. pH optimum 7.5 - 12.0.
| 暂无评价 |
合作伙伴
北京欣华绿源科技有限公司 地址：北京市海淀区农大南路甲100号 010-82899143 技术支持： 111