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GelRed 和GelGreen 是(shi)两种集高灵敏、低毒性和超稳定(ding)于(yu)一身的极佳的荧光核酸凝胶染(ran)色试剂。其水溶染(ran)色剂通(tong)过(guo)美(mei)(mei)国(guo)环(huan)保局(ju)安(an)全认定(ding),废弃物可直接(jie)倒(dao)入下(xia)水道(dao),而不(bu)会(hui)造成任何环(huan)境污(wu)染(ran)。(下(xia)载美(mei)(mei)国(guo)Litron Laboratories, Inc. 完整安(an)全检测(ce)报(bao)告(gao))
目(mu)(mu)前大多(duo)数商业化的(de)核(he)酸染(ran)料(凝(ning)胶(jiao)(jiao)染(ran)色试(shi)剂(ji))总是在安全性(xing)(xing)(xing)、稳定性(xing)(xing)(xing)和灵敏(min)性(xing)(xing)(xing)等方(fang)面不(bu)完全令人(ren)满意。例如(ru),虽然 EB (溴化乙啶)作为(wei)目(mu)(mu)前使用(yong)最广泛的(de)核(he)酸凝(ning)胶(jiao)(jiao)染(ran)色试(shi)剂(ji),能(neng)够(gou)在多(duo)数应用(yong)中提供可以接(jie)受(shou)的(de)灵敏(min)度,但(dan)它是一(yi)种高(gao)(gao)诱变性(xing)(xing)(xing)的(de)化学物(wu)质。而且EB染(ran)色后具有较(jiao)高(gao)(gao)的(de)背(bei)景荧光信号
。 SYBR Green I 和(he) SYBR Gold 也(ye)被厂(chang)家宣传为最灵(ling)敏的(de)凝胶染(ran)(ran)色(se)试剂。但(dan) SYBR Green I 尤其是 SYBR Gold 在常用的(de)微碱性(xing)电(dian)泳缓冲溶液(ye)或预制(zhi)凝胶中会快速降解(jie),稳定性(xing)差导(dao)致(zhi)染(ran)(ran)色(se)效(xiao)果极不可靠。 SYBR safe 被认为是市场上较为安全的(de)核酸染(ran)(ran)料 ,但(dan)它的(de)染(ran)(ran)色(se)效(xiao)果还远(yuan)不及(ji) SYBR Green I 。
至于国内(nei)有公司宣(xuan)称的新产品(pin)Goldview,我们不想多(duo)加评(ping)论。因(yin)为从极为相似(si)的对(dui)比(bi)试验结果(guo)(guo)来(lai)看,该产品(pin)似(si)乎就是AO(丫(ya)啶橙 ,一种剧(ju)毒产品(pin),且荧光亮度不佳(jia))。请看Goldview 与 AO 对(dui)比(bi)试验结果(guo)(guo)(其中(zhong)Goldview是从国内(nei)某公司采购,AO则来(lai)自(zi)SIGMA,报告来(lai)自(zi)开放生物)
GelRed 和 GelGreen 无论(lun)用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)于(yu)预(yu)制凝(ning)胶(jiao)染色(se)还是(shi)(shi)凝(ning)胶(jiao)电(dian)泳(yong)后(hou)染色(se),都表现出(chu)了极(ji)高的(de)(de)(de)(de)灵(ling)敏度。为配合(he) 312 nm UV 凝(ning)胶(jiao)成(cheng)像系统而设计的(de)(de)(de)(de) GelRed ,在(zai)使(shi)用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)了我们新(xin)开发的(de)(de)(de)(de)具有专利的(de)(de)(de)(de)试验(yan)步(bu)骤(zhou)后(hou)(该试验(yan)步(bu)骤(zhou)中(zhong)(zhong)使(shi)用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)稀释的(de)(de)(de)(de) NaCl 溶(rong)液(ye)替代传统的(de)(de)(de)(de) TBE 缓冲溶(rong)液(ye)),在(zai)凝(ning)胶(jiao)电(dian)泳(yong)后(hou)染色(se)中(zhong)(zhong)优于(yu)或者(zhe)至(zhi)少相当于(yu) SYBR Gold 。但与(yu)(yu) SYBR Gold 不同(tong), GelRed 在(zai)预(yu)制凝(ning)胶(jiao)中(zhong)(zhong)使(shi)用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)时仍然有极(ji)高的(de)(de)(de)(de)灵(ling)敏度,事实(shi)上GelRed 在(zai)检测(ce)低浓度、微量 DNA 方面比 EB 表现出(chu)更高的(de)(de)(de)(de)灵(ling)敏度,尤(you)其对小分子量的(de)(de)(de)(de) DNA 检测(ce)非(fei)常灵(ling)敏(图1)。 GelGreen 可(ke)以满足使(shi)用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong) 488 nm 激(ji)光(guang)凝(ning)胶(jiao)扫描仪(yi)或者(zhe)可(ke)见光(guang)激(ji)发的(de)(de)(de)(de) Dark Reader 的(de)(de)(de)(de)研究人员的(de)(de)(de)(de)使(shi)用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)要求。 GelGreen 无论(lun)是(shi)(shi)在(zai)预(yu)制凝(ning)胶(jiao)还是(shi)(shi)凝(ning)胶(jiao)电(dian)泳(yong)后(hou)染色(se)中(zhong)(zhong)都与(yu)(yu) SYBR Green I 灵(ling)敏度相当,但不存(cun)在(zai)后(hou)者(zhe)的(de)(de)(de)(de)不稳定性问题。实(shi)际上, GelRed 和 GelGreen ,特(te)别是(shi)(shi) GelRed 非(fei)常稳定,可(ke)以长期在(zai)室温下(xia)保存(cun)。当这两种染料稀释在(zai) TBE 或者(zhe)类似的(de)(de)(de)(de)电(dian)泳(yong)缓冲溶(rong)液(ye)中(zhong)(zhong)时甚至(zhi)可(ke)以使(shi)用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)微波炉加热(re),便(bian)于(yu)采用(yong)(yong)(yong)(yong)(yong)常规方法制备预(yu)制凝(ning)胶(jiao)。含有染料的(de)(de)(de)(de)预(yu)制凝(ning)胶(jiao)可(ke)以成(cheng)批制备,长期保存(cun)。
同样重要(yao)的(de)是(shi), GelRed 和(he) GelGreen 相比 EB 或 SYBR Green I 提(ti)高(gao)了(le)(le)安全性(xing)。 独(du)立的(de)测(ce)试服务公司( Litron Laboratories, Inc. )进(jin)行的(de)标(biao)准(zhun)艾(ai)姆斯氏测(ce)试结果表明, 在 18.5 μ g /mL (该浓度远高(gao)于推荐用(yong)于电泳(yong)后染(ran)(ran)色(se)的(de) 约(yue) 4 μ g/mL 的(de) 3X 染(ran)(ran)色(se)液 )浓度下, GelGreen 没有(you)(you)诱变性(xing),而 GelRed 也仅在 S9 代(dai)谢活(huo)化时有(you)(you)微(wei)弱的(de)诱变性(xing)。 GelRed 和(he) GelGreen 的(de)特殊化学结构(gou)使其难以穿透细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)膜进(jin)入细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao),正是(shi)这一特性(xing)降(jiang)低了(le)(le)染(ran)(ran)料(liao)的(de)细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)毒性(xing)。相反, SYBR Green I 广泛地用(yong)于活(huo)细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)线粒体(ti)和(he)核 DNA 染(ran)(ran)色(se),这正是(shi)由(you)(you)于它能快速的(de)被细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)吞入。由(you)(you)于已知 SYBR Green I 对紫(zi)外线导(dao)致的(de)突变有(you)(you)强烈的(de)增强作用(yong),因此它的(de)高(gao)细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)膜透性(xing)使它在紫(zi)外环境观察时成为凝胶染(ran)(ran)色(se)的(de)主要(yao)有(you)(you)害物质。

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